蝙蝠蛾拟青霉菌丝体研究进展（一） 菌丝究进阐述了研究前景

利用蝙蝠蛾拟青霉进行人工深层发酵培养所得的蝙蝠菌丝体产物是野生虫草的常用替代品。本文介绍了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的蛾拟研究概况，总结了其液体深层发酵的青霉研究进展、化学成分与药理作用，菌丝究进阐述了研究前景，体研以期为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的蝙蝠开发利用提供参考。

冬虫夏草(Cordycepssinensis)是蛾拟一种寄生于蝙蝠蛾幼虫的虫生真菌及其寄主蝙蝙蝠蛾幼虫尸体构成的虫菌复合体，具有益肾补肺、青霉祛痰止咳等功效，菌丝究进为珍贵的体研中药材，药用历史悠久。蝙蝠冬虫夏草对咯血、蛾拟痨嗽、青霉虚喘精、菌丝究进腰膝酸软、体研自汗盗汗等病症均有疗效。蝙蝠蛾拟青霉为丛梗孢科瓶梗青霉属真菌，是从新鲜冬虫夏草的子座中分离获得，并经鉴定命名的一种虫草菌。现代药理学证明，发酵虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分类似，具有相似的药理作用。因为发酵方法成本相对较低且条件易于控制，目前利用液体深层发酵方法进行工业化生产菌丝体，已成为解决当前虫草资源匮乏的重要途径之一。

1蝙蝠蛾拟青霉菌丝体研究概况

蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyceshepiali)是从新鲜冬虫夏草中分离所得的隶属丛梗孢科(Moniliaceae)瓶梗青霉属(PaecilomycesBain)虫生真菌。1982年，中国医学科学院药物研究所的研究人员从青海化隆采集的新鲜冬虫夏草中分离得到了Cs-4菌株，经鉴定可知，该Cs-4菌株是蝙蝠蛾拟青霉。此外，1982年，中国中医科学院中药研究所有关学者从云南迪庆采集的冬虫夏草样品中分离获得的菌株，经培养与形态学研究，可将其鉴定为蝙蝠蛾拟青霉。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体是利用蝙蝠蛾拟青霉通过人工深层发酵培养所得，已作为冬虫夏草的代用品在中成药和保健食品中广泛使用。目前，市场上的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体产品主要为金水宝胶囊。

2蝙蝠蛾拟青霉菌丝体培养方法

当前，蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的培养已不仅仅停留在摇瓶和小罐发酵的试验水平上，许多菌丝体产品已经步入工业化大生产。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的液体深层发酵培养大多以葡萄糖或淀粉类物质为碳源，动植物蛋白为氮源，并且工业化生产菌丝体的培养基中含有的天然成分足以满足营养需求，并不需要再增加氨基酸等。已有很多学者对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体液体深层发酵培养进行研究。

尚静德等用正交试验法选出了最佳发酵培养基，配方为2%葡萄糖、0.8%乳糖、1%氨基酸复合粉、0.1%硫酸锌、0.1%硫酸镁、0.1%磷酸二氢钾、15%马铃薯。姜文侠等[7]以20m3发酵罐进行发酵培养，对发酵菌丝体主要成分进行分析检测可得，菌丝体收率为2.5%，腺苷含量为0.24%，甘露醇含量为8.3%。冯健等采用液体深层发酵法培养蝙蝠蛾拟青霉菌丝体，得到了最佳发酵条件，结果表明，以玉米浆、玉米粉为主要原料，添加硫酸镁和磷酸氢二钾为辅助原料，在摇瓶装量10%、摇床转速150r/min、培养温度18～20℃、培养周期72h条件下，菌丝收率最高可达18.1g/L。

张倩等对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体高产腺苷液体培养基进行了优化，结果表明，在摇瓶装量100mL(250mL)、接种量5%、摇床转速140r/min、温度25℃、发酵周期6d的条件下，蝙蝠蛾拟青霉菌丝体高产腺苷液体发酵培养基的最佳配方为2%葡萄糖、2%酵母浸出粉、0.05%硫酸锌、0.05%硫酸锰，同时该培养基下培养出蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中腺苷含量较优化前提高了390%，达到2.85mg/g。

巩伯梁等采用响应面法对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体液体发酵培养基配方进行了优化，结果表明，在含有8.25%马铃薯、1%蔗糖、0.81%蚕蛹粉、1%玉米粉、0.5%蛋白胨、0.1%磷酸二氢钾、0.1%硫酸铵、0.1%硫酸镁等的培养基中发酵培养，蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中腺苷含量可达3.44mg/g。殷海松等采用单因素试验法研究不同培养基成分对胞外多糖生产和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体生物量的影响，结果表明，最优蝙蝠蛾拟青霉菌丝体液体发酵培养的培养基为土豆200g/L、葡萄糖30g/L、蛋白胨15g/L、MgSO4·7H2O1.5g/L、KH2PO43.0g/L；采用最优发酵培养基，在摇瓶培养条件下，获得的最大胞外多糖产量和最大菌丝体生物量分别较优化前提高了48.1%、34.6%，含量分别为2.80、24.99g/L。

张命龙等通过液体摇瓶发酵培养，以菌丝体生物量和腺苷含量为主要指标，确定了摇瓶发酵高产菌丝体和腺苷的培养基配方，最佳配方为葡萄糖5g/L、玉米淀粉40g/L、玉米浆25g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸锌1.5g/L、MgSO4·7H2O1g/L、VB125mg/L；适宜培养条件为摇瓶装量150mL(500mL)、8%接种量、初始pH值6.0、转速120r/min、温度26℃、培养时间7d；在该发酵条件下，菌丝体生物量为25.2g/L，并对菌丝体中腺苷含量进行高效液相色谱(HPLC)检测，腺苷含量达到2.76mg/g。

3蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的化学成分

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体主要含有腺苷、虫草多糖、虫草素、甾醇类物质、氨基酸和多种无机元素等。许春燕等系统分析了蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体的主要营养与活性成分，包括13种脂肪酸、18种必需氨基酸以及8种微量元素；此外，在蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体中还有较高含量的粗多糖、核苷、多酚(2.59mg/g)和三萜(4.89mg/g)等活性成分。洪志来等采用硅胶柱、凝胶柱、高效液相色谱等技术对用95%乙醇提取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体进行分离纯化后得到了11个化合物，经鉴定，分别为(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇、(22E,24R)-麦角甾-7,9,22-三烯-3β-醇、(22E,24R)-麦角甾-6β-甲氧基-7,22-二烯-3β,5α-二醇、环(亮-色)二肽、环(异亮-色)二肽、环(缬-色)二肽、胡萝卜苷、4-(2-甲酰基-5-羟甲基-1-氢-吡咯-1-基)丁酸、4-(2-甲酰基-5-甲氧基甲基-1-氢-吡咯-1-基)丁酸、5-羟甲基糠酸和琥珀酸等，其中除了(22E,24R)-麦角甾-6β-甲氧基-7,22-二烯-3β,5α-二醇、环(亮-色)二肽、5-羟甲基糠酸和琥珀酸以外，其他均为首次从拟青霉属真菌中分离得到。

樊晓飞等用梯度提取、反复重结晶分离和纯化，共分离得到7个化合物，并且采用NMR等谱学方法进行了化学成分的分析，分别检测出麦角甾醇、β-谷甾醇、4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、啤酒甾醇、麦角甾醇过氧化物、甘露醇和1-油酰基-2-亚油酸-3-棕榈酸甘油等化合物。采用GC-MS进一步分析石油醚提取物中的油状组分，经分析鉴定主要为亚油酸和反油酸。于洪飞以腺苷和D-甘露醇为评价指标，并优化复合酶法提取工艺对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体进行提取，使甘露醇和腺苷的含量分别占提取物的12.56%和2065μg/g。仲伟鉴等比较了蝙蝠蛾拟青霉菌丝体与天然虫草中的无机元素含量，共检测出28种无机元素，其中钙、钾、镁、锌、镍、硼和锶等7种元素在蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中的含量高于天然虫草，其他组分含量的分布趋势与天然虫草基本一致。

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